Culture de rhizobium (bactérie fixatrice d'azote)

Culture de rhizobium (bactérie fixatrice d'azote) - Sciences - Discussions

Marsh Posté le 19-11-2005 à 13:36:34    

Hello! Voila, je sais plus trop pourquoi mais j'avais décidé de planter un harricot l'été passé. Ce matin je me dis que je vais le déterrer pour voir si il y avait eu symbiose avec des bactéries du type rhizobium. Et, en effet, les petits nodules étaient présents sur les racines.
Ca sert peut etre a rien mais j'aimerais bien faire une culture de ces bactéries pour le fun.  
Le problèmes c'est
-je n'ai pas de boites de pétri
-je n'ai pas de gel nutritif (agarose ou autre)
Bref... j'ai pas le matos. Je pourrais "emprunter" au labo de l'unnif mais bon, restons honnètes.
En plus j'ai pas la théorie, mes premiers cours de microbio ne commencant que dans 3 mois. Disons que là j'essaye de faire de mon mieux avec mes connaissances en biochimie et sciences du sol (+ écologie).
Alors voila ce que j'ai fait: J'ai écrabouillé les nodules sur un papier essuie tout que j'ai ensuite déposé dans un petite coupelle. J'ai imbibé le tout d'eau et j'ai versé un tout petit peu de sucre en poudre. J'ai recouvert le tout de céllophane que j'ai légèrement percé pour le renouvellment de l'air.
 
J'aimerais savoir si j'ai plus ou moins fait ce qu'il fallait. A quelle température les garder? Ai-je foiré et elles sont déja toutes mortes ou bien puis-je espèrer une multiplication ? Quelles autres substrat ajouter (dans la limite de mes moyens) ?
 
Haaaaaaaaaa si j'avais un labo....

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Marsh Posté le 19-11-2005 à 13:36:34   

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Marsh Posté le 19-11-2005 à 16:44:15    

Pour la temperature, au moins, c'est facile, puisqu'elles se developpent dans la terre dont la temperature tourne toujours autour de 17°.Ça doit sans doute pouvoir supporter plus, vers les 20-25°
Pour le reste, le problème c'est que la culture va être polluée par toutes sortes d'autres bacteries qui étaient dans la terre ou sur les racines, et que tout ça va se developper ensemble de manière anarchique.
La solution classique, c'est de faire une solution TRES diluée de liquide contenant les bactéries, et de la verser sur un milieu nutritif solide(gelatine sucrée, ou viandox suivant les souches, sterilisé à l'autoclave ), de vider la boite en ne laissant que la fine couche de liquide qui adhère à la gelatine.
Après quelques heures ou jours, on voit se developper des colonies, on identifie la souche qu'on veut, on en prend très peu avec une pointe d'aiguille, et on re-ensemence une autre boite, jusqu'à avoir une colonie qui ne contient que le germe voulu.
Le difficile est d'empêcher les germes presents dans l'air de polluer la culture, on est forcé de travailler dans des tubes de verre bouchés avec un tampon de cotton flambé, et de n'ouvrir le tube qu'au dessus d'une flamme.
Le materiel peut se resumer à quelques tubes à essai, de la gelatine achetée à Carrefour ,et une cocotte minute comme autoclave.
  Ah, ça me rapelle mes TP de biologie, microbiologie et physiologie vegetale (on disait "BMPV" )


Message édité par charlie 13 le 19-11-2005 à 16:54:38
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Marsh Posté le 19-11-2005 à 18:07:44    

Oups la gaffe j'avais complètement oublié les autres bactéries, bien joué !  
Bon ben c'est pas grave je vais laisser comme ca voir comment ca évolue. De toute façon je ferai la manip avec du vrai matériel après noël donc je vais pas commencer à acheter du matos.  
Si je vois que y'a quelque chose qui de développe je l'inoculerai à tout hasard sur une graine de légumineuse pour voir si les nodules apparaissent, preuve que j'ai plus ou moins réussi ma culture.
Je cultiverai dans le la ouate pour éviter qu'il y ait déja des rhizobium (rhizobia?) dans le substrat.
Cela dit je me demande si les graines des légumineuses ne sont pas déjà prétraitèes et inoculées, ce qui fausserait tout.  
Bonne idée nan ?

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